Bảo tàng Vatican nằm trong thành phố Vatican và bao gồm một số triển lãm nằm trong các phòng trưng bày bảo tàng. Bộ sưu tập bắt đầu bằng việc Đức Thánh Cha Julius II mua bức tượng “Laocoon và các con ông” vào năm 1506. Mặc dù bộ sưu tập này có thể được lưu giữ phía sau các bức tường của Vatican như các bộ sưu tập cá nhân của Đức Giáo hoàng nhưng may mắn thay cho nhân loại, các vị Giáo hoàng đã chọn cho phép trưng bày các tác phẩm nghệ thuật cho công chúng ngay từ đầu. Điều này được thực hiện để thúc đẩy người dân học hỏi các kiến thức về nghệ thuật, lịch sử và văn hóa. Ngoài việc tiếp cận với một số tác phẩm nghệ thuật hay nhất thế giới, công chúng cũng được nhìn thấy bên trong các cung điện của Vatican, nơi chứa các bộ sưu tập.
Có nhiều bộ sưu tập nhỏ hơn tạo nên bộ sưu tập của Bảo tàng Vatican, trong đó có những điểm nổi bật mà du khách không nên bỏ qua. Phòng trưng bày nghệ thuật Pinacoteca Vaticana có những bức tranh và tranh thờ nổi tiếng được tạo ra bởi những danh họa bậc thầy, bao gồm Giotto, Raphael và da Vinci cũng như tác phẩm đặc trưng của Caravaggio The Entombment of ChriSt. (Lễ chôn cất Chúa Jesus). Bộ sưu tập Museo Pio - Clementino có các tác phẩm điển hình về điêu khắc Hy Lạp và La Mã. Ngoài ra, bảo tàng Vatican còn có các bộ sưu tập đồ sộ các hiện vật của Ai Cập cổ đại, nghệ thuật tôn giáo đương đại và bản đồ trang trí của Ý qua các thời đại.
Nơi đây có một loạt căn phòng dành riêng cho bậc thầy thời Phục hưng Raphael. Ban đầu nơi này được dùng làm một dãy phòng dành cho Giáo hoàng Julius II, nhưng hiện trở thành nơi linh thiêng trưng bày các tác phẩm của vị danh họa đại tài. Bốn căn phòng ở đây có một số bức bích họa vĩ đại nhất còn tồn tại và các công trình khác của Raphael, bao gồm The School of Athens (Trường học Athens), Adam and Eve và The Parnassus (Núi Thi Sơn).
Tổng cộng có 54 phòng trưng bày trong bảo tàng Vatican, đáng chú ý nhất phải kể đến nhà nguyện Sistine. Đây là nơi được thiết kế và vẽ bởi một nhóm những nghệ sĩ trang trí nội thất giỏi nhất từng kết hợp với nhau. Các bức tường được phủ kín bởi các bức bích họa tuyệt đẹp của Pietro Perugino, Sandro Botticelli, Cosimo Rosselli và các danh họa đại tài khác thời Phục hưng, trong khi trần nhà là tác phẩm được coi là vĩ đại nhất của Michelangelo mang tên The Creation of Adam and Eve (Sự ra đời của Adam và Eve).